Stock solution Working solution
RNase A: 10 mg/ml in Tris-Cl pH 7.5 dilute 1/10-1/100 by SSC
15 mM NaCl at 37ﾟC
100ﾟCにて15' 煮沸
store at -20ﾟC
RNase T1:
DNase I:
Pronase: 20 mg/ml in DW dilute 1/20 (1 mg/ml) by
37ﾟC で self-digestion 0.01 M Tris-Cl pH 7.8
store at -20ﾟC 0.01 M EDTA
0.5 % SDS at 37ﾟC
Proteinase K: 20 mg/ml in DW dilute 1/400 (50 ug/ml) by
store at -20ﾟC 0.01 M Tris-Cl pH 7.8
0.01 M EDTA
0.5 % SDS at 37ﾟC
20 x SSC: NaCl 175.3 g ( 3 M )
Na-citrate 88.2 g ( 0.3 M )
H2O 800 ml
pH 7.0 (with 10 N NaOH)
per liter?
*sterilized by autoclaving
Alkaline phosphatase
0.1 unit/ug DNA at 65ﾟC
25 mM TrisHCl pH 8.0
for 30 min
特 別 な 酵 素 類
Ｓ１ヌクレアーゼ (Aspergillus oryzae)
この酵素は，single stranded DNA を切断・分解する。dsDNA, dsRNA, DNA･RNA hybrids は比較的分解されにくい。しかし，大量の酵素があると二重ラセンも分解する。
single-standed RNA も多少は分解するが，DNA のほうにより活性がある。
ssDNA or ssRNA -- pH 4.5, Zn++ -- 5'pdN or 5'prN
Terminal transferase (Terminal Deoxynucleotidyl Transferase) calf thymus
この酵素は，deoxynucleotidesをDNA 分子の3'-OH 末端に付ける働きを持つ。
Micrococcal Nuclease
mRNAの分解に用いられる。Caイオンの存在下で活性を持つ。
STOCK SOLUTION:
50 mM CaCl2
100 mM EGTA (pH 7.0)
micrococcal nuclease (150,000 units/ml)
in 50 mM glycine(pH 9.2) & 5 mM CaCl2
creatine phosphokinase type I (40 units/ml) in 50% glycerol
hemin stock; 4 mg/ml in ethylene glycol
hemin stock solution 1) 20 mg of hemin in 400 ul of 0.2M KOH
2) H2O 600 ul
1 M TrisCl (pH 7.8) 100 ul
（0.1 M HCl で pH 7.8 にする）
3) 4 ml ethylene glycol
5000g で遠心，不溶物を除去
1,2,3 の順に加える。
これはreticulocyte lysate initiation factor E1f2aの阻害剤
手順： 100 reticulocyte lysate
1 hemin solution
2 CaCl2 solution
mix
0.05 micrococcal nuclease (150,000 units/ml) for 15' at 20ﾟC
2 100 mM EGTA
0.4 creatine phosphokinase (40 units/ml)
dispense the treated lysate in 250-500 ul
store at -70ﾟC