Ampr Tetr ---> Ampr Tets でスクリ−ニングする。
transformation --> LB 30' --> Amp (50 ug/ml) 37ﾟC x 3 hr
↓
+ 20 ug/ml Tet 37ﾟC 45' incubate
↓
+ 150 ug/ml シクロセリン 37ﾟC 3 hr incubate
↓
DW に suspend 5 ml
↓
50 ug/ml LB 1.3 ml 37ﾟC 30'
↓
+ 2.7 ml LB 0.7 % Agar
up 0.7 % Agar up 50 ug/ml Amp
down 1.5 % Agar down 50 ug/ml Amp
寒天を重層する。
Bochner et. al. (1980) Positive selection for loss of tetracycline resistance. J. Bacteriol. 143:926-933.
クロラムフェニコ−ルによるプラスミドの増幅
この方法は，Ｒ１プラスミドに適用されるものでどんなものでもＯＫという訳ではないらしい。
１日目 ２５ｕｇ／ｍｌのテトラサイクリンを ＬＢ（５ｍｌ）に入れ一晩培養。
２日目 ６００ｍｌのＬＢに移し，３時間後に，２５０ｕｇ／ｍｌ（最終濃度）のク ロラムフェニコ−ルを加える。一晩培養。
３日目 集菌し，４゜Ｃ，１００ｍｌのＴｒｉｓＥＤＴＡ（ｐＨ８．０）で洗う。
再び集菌し，２ｍｌのＳＥＴ（０゜Ｃ）中で，リゾチ−ム処理（１０分間）
その後，０．２５Ｍ ＥＤＴＡを加え（４゜Ｃ，１ｍｌ）
つぎに，１％ Ｂｒｉｊ，０．４％ ＤＯＣ，０．０６Ｍ ＥＤＴＡ
ＴｒｉｓＨＣｌ （ｐＨ８．０） を３・２ｍｌ加える。（１０分処理）
４８０００ｇで，４分間遠心。
ＣｓＣｌで分離。
Uhin (1979) Gene 6; 91-106.